概述

重組腺相關病毒（rAAV）已成為體內基因治療的主要遞送平臺。rAAV基因療法藥物Glybera（Alipogene Tiparvovec，由uniQure公司研發）于2012年獲歐洲藥品管理局（EMA）批準，用于治療脂蛋白脂肪酶缺乏癥。2018年，FDA批準了在美國上市的rAAV基因療法Luxturna（Voretigene neparvovec-rzyl）。

(圖1：rAAV介入性基因治療臨床試驗概覽，引用自Wang, D.等人2019年的研究)

AAV載體基礎

AAV屬于細小病毒科依賴病毒屬，是一種無包膜的小型DNA病毒，基因組大小約為4.7 kb。AAV載體是基于AAV基因組改造的基因遞送工具。

•   基因組結構：兩端含有反向末端重復序列（ITR），其中D序列與病毒基因組的高效釋放、選擇性復制和包裝密切相關；編碼區包含兩個開放閱讀框，分別編碼4種Rep蛋白（負責基因組復制）和3種Cap蛋白（負責病毒組裝與包裝）。

•   載體設計：在設計載體時，需要將編碼區替換為靶基因及相關功能片段，僅保留兩端的反向末端重復序列。

•   生產方式：通常采用三質粒共轉染法，即將包含AAV載體基因組的質粒、腺病毒輔助基因質粒、以及表達CAP和REP蛋白的質粒共同轉染細胞。

•   血清型：目前已發現13種AAV血清型（AAV1至AAV13），它們可以靶向不同的受體和組織。在制備載體時，需要根據疾病部位和靶組織選擇合適的血清型。

AAV載體在基因治療中的應用

•   基因替換：通過將治療基因遞送至靶細胞，利用染色體同源重組替代功能缺陷的基因。這主要適用于隱性單基因遺傳病。

•   基因編輯：參與DNA修復過程，遞送包含靶序列同源重組臂和治療基因的基因組，通常還會與Cas9蛋白編碼序列共同遞送，用于直接修復致病的基因突變。

•   基因沉默：以RNA干擾（RNAi）為核心機制，在mRNA水平上調控基因表達，從而下調致病基因的表達。

•   基因添加：通過補充功能性基因來治療復雜的遺傳病或獲得性疾病。除了單基因病外，該策略已在對HIV感染的臨床測試中展開。

AAV的免疫原性

1. 野生型AAV預存免疫

人類普遍存在針對野生型AAV的免疫記憶。

•   體液免疫：約有30%-60%的人群攜帶抗AAV2中和抗體。由于不同血清型的衣殼氨基酸序列和結構高度同源，導致中和抗體之間存在廣泛的交叉反應。

•   細胞免疫：可以通過ELISPOT和流式細胞術檢測到針對AAV1和AAV2的特異性T細胞。這類T細胞具有記憶表型，在脾臟等外周免疫器官中更為常見，且在成人和兒童中的檢出水平相似。

2. AAV載體誘導的免疫應答

•   先天免疫：載體的核酸成分會通過病原體相關分子模式（PAMP）被免疫細胞的模式識別受體（PRR）識別，進而激活NF-κB和IRF轉錄因子，誘導促炎細胞因子或I型干擾素的表達，可能引發炎癥反應。

•   適應性免疫：抗原提呈細胞（APC）提呈衣殼蛋白表位，激活CD8?細胞毒性T細胞和CD4?輔助T細胞，介導體液免疫和細胞免疫應答。這會導致細胞毒性T細胞清除被AAV轉導的細胞，引起靶器官炎癥，從而降低基因轉移的持續時間和療效。

3. 轉基因產物的免疫應答

免疫原性受到宿主因素（如基礎疾病、遺傳背景）和載體因素（如靶器官、啟動子的組織特異性）的共同影響。相比免疫豁免器官（如肝臟）的局部給藥，全身或肌肉注射載體的免疫原性顯著更高。

AAV免疫檢測

AAV載體的免疫原性是臨床應用的核心障礙之一，需要通過基線免疫參數檢測來指導治療方案。

•   檢測方法：包括體外細胞轉導抑制（TI）試驗、小鼠體內TI試驗，以及基于ELISA的抗衣殼總抗體（TAb）檢測。

•   產品支持：創迪診斷提供全系列的AAV抗體（可識別完整病毒衣殼、病毒亞基及復制酶），以及多血清型的AAV滴度ELISA試劑盒。

核心產品列表

AAV抗體

•   DMAB6350：抗AAV1（完整顆粒）單抗，克隆BEL2b，小鼠來源。可識別AAV1、AAV6、AAV12的完整衣殼（包括空殼和實心顆粒）。

•   DMAB-CS24040：Magic™ 抗AAV2（完整顆粒）單抗，克隆26H5，兔來源。識別AAV2構象表位，不與AAV1、5、6、8、9、DJ、rh.1發生交叉反應。

•   CABT-B9062：抗AAV2（完整顆粒）單抗，克隆B31，小鼠來源。可識別AAV2、AAV2 7m8、AAV3的完整顆粒（空殼/實心）。

•   DPAB2423：抗AAV2 VP1/VP2/VP3多抗，兔來源。識別變性的VP1/VP2/VP3蛋白，覆蓋AAV1、2、3、5、6、7、8、9、rh10、DJ、rh74等多種血清型。

AAV抗原（VLP/ELISA對照）

•   DAG-WT823：重組AAV1型病毒樣顆粒。

•   DAGC256：AAV2衣殼（用于ELISA對照）。

•   DAGC259：AAV8衣殼（用于ELISA對照）。

AAV抗體ELISA試劑盒

•   DEIASL345：人抗AAV8抗體ELISA試劑盒，用于定性檢測。

•   DEIASL348：小鼠抗AAV9抗體ELISA試劑盒，用于定性檢測。

•   DEIASL347：人抗AAV2抗體ELISA試劑盒，用于定性檢測。

更多產品信息，請聯系中國區域代理商：上海起發實驗試劑有限公司

（注：本文內容基于品牌公開資料及行業常規信息整理，具體以品牌信息文檔為準。）