Mohs IHC 程序

莫氏冷凍組織的標(biāo)本制備

1. 將標(biāo)本嵌入 OCT 中的低溫恒溫器內(nèi)。

2. 在 4-5 µm 處切割切片并安裝在帶正電的載玻片上，例如 Bio SB Hydrophilic Plus 載玻片 (BSB 7028) 或 TintoDetector 蓋間隙載玻片 (BSB 7006) 的下三分之一處。

3. 在室溫下風(fēng)干載玻片 2 分鐘，然后在培養(yǎng)箱或干浴中在 60°C 下孵育載玻片 3 分鐘。

4. 在室溫下用丙酮固定 2 分鐘，然后讓載玻片風(fēng)干。

莫氏冷凍組織的預(yù)處理

1. 將 TintoDetector 培養(yǎng)箱預(yù)熱至 110 °C。

2. 將 TintoDetector Cap Gap 載玻片 (BSB 7006) 面對面放置，然后將它們插入 TintoDetector 載玻片支架 (BSB 7003)。

3. 將載玻片浸入含 EDTA 的 ImmunoDNA Retriever 中，通過毛細(xì)作用提取足夠的溶液以覆蓋組織。

4. 在預(yù)熱的 TintoDetector 培養(yǎng)箱中加熱載玻片 3 分鐘。

5. 將載玻片轉(zhuǎn)移至室溫并冷卻 1 分鐘。

莫氏 IHC 檢測

1. HIER 后，將載玻片轉(zhuǎn)移到 ImmunoDNA 清洗機(jī)，靜置 1-2 分鐘。

2. 對于手動(dòng)染色，在環(huán)境溫度下進(jìn)行抗體孵育。對于自動(dòng)染色方法，請根據(jù)儀器制造商的說明進(jìn)行抗體孵育。

3. 用 ImmunoDNA 洗滌器或去離子水清洗載玻片。

4. 繼續(xù) IHC 檢測協(xié)議。用 ImmunoDNA 洗滌液在每個(gè)步驟之間清洗載玻片。

HRP Green 免疫組化方案的縮寫 Mohs PolyDetector Plus DAB HRP Brown

1. 與一抗孵育 5 分鐘

2. 用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗

3. 用 M/R 鏈接孵育 4 分鐘

4. 用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗

5. HRP 標(biāo)簽 4 分鐘。

6. 用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗

7. 準(zhǔn)備

   • DAB Brown（在 1ml DAB 緩沖液中加入 1 滴 DAB Chromogen；充分混合）

   • 或 HRP Green（在 1 ml HRP Green Buffer 中加入 1 滴 HRP Green Chromogen；充分混合）

8. 用 DAB 或 HRP Green 孵育 1-2 分鐘

9. 用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗

10. 用蘇木精或核固紅復(fù)染 30 秒

11. 用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗

12. 使用 AquaMounter 安裝或使用 Fast ChromoProtector 使組織脫水，然后使用 PermaMounter 安裝

此協(xié)議也可用于使用檸檬酸鹽或 EDTA 檢索的 FFPE 組織。